Tìm kiếm
Đang tải khung tìm kiếm
Kết quả 1 đến 1 của 1

    TIẾN SĨ Nghiên cứu đặc tính của chitinase tự nhiên và biểu hiện chitinase tái tổ hợp từ chủng nấm Lecanicillium lecanii

    D
    dream dream Đang Ngoại tuyến (18495 tài liệu)
    .:: Cộng Tác Viên ::.
  1. Gửi tài liệu
  2. Bình luận
  3. Chia sẻ
  4. Thông tin
  5. Công cụ
  6. Nghiên cứu đặc tính của chitinase tự nhiên và biểu hiện chitinase tái tổ hợp từ chủng nấm Lecanicillium lecanii

    MỤC LỤC
    Trang
    LỜI CAM ĐOAN i
    LỜI CẢM ƠN ii
    MỤC LỤC . iii
    DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vii
    DANH MỤC HÌNH . ix
    DANH MỤC BẢNG xii
    MỞ ĐẦU . . 1
    1. Đặt vấn đề . 1
    2. Mục tiêu nghiên cứu 2
    3. Nội dung nghiên cứu 2
    4. Những đóng góp mới của luận án 3
    5. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài luận án 3
    Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 4
    1.1. Nấm Lecanicillium lecanii 4
    1.2. Chitinase 5
    1.2.1. Nguồn gốc của chitinase . 6
    1.2.2. Phân loại chitinase 7
    1.2.3. Cấu trúc và trung tâm hoạt động của chitinase . 9
    1.2.4. Cơ chế phản ứng của chitinase . 12
    1.2.5. Các yếu tố ảnh hưởng tới hoạt tính của chitinase . 14
    1.2.6. Các yếu tố ảnh hưởng tới quá trình sinh tổng hợp chitinase 16 iv
    1.3. Ứng dụng của nấm L. lecanii và chitinase . 18
    1.3.1. Trong lĩnh vực nông nghiệp và bảo vệ môi trường 18
    1.3.2. Trong lĩnh vực y học 22
    1.3.3. Trong lĩnh vực công nghệ sinh học 23
    1.4. Một số nghiên cứu về gen và biểu hiện gen mã hóa chitinase . 24
    1.4.1. Trên thế giới . 24
    1.4.2. Ở Việt Nam . 28
    Chương 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 31
    2.1. Vật liệu và hóa chất . 31
    2.1.1. Chủng giống . 31
    2.1.2. Thiết bị . 31
    2.1.3. Hóa chất . 31
    2.1.4. Dung dịch và đệm 32
    2.1.5. Môi trường nuôi cấy . 32
    2.2. Phương pháp nghiên cứu 33
    2.2.1. Phương pháp nuôi cấy 33
    2.2.2. Phương pháp hóa sinh 35
    2.2.3. Tinh sạch chitinase . 37
    2.2.4. Nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố lý hóa lên hoạt tính và độ
    bền của chitinase tự nhiên và tái tổ hợp .

    39
    2.2.5. Các phương pháp sinh học phân tử 42
    2.2.6. Phương pháp thử nghiệm . 46
    2.2.7. Xử lý số liệu . 48 v
    Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN . 49
    3.1. Sàng lọc, kiểm tra và khảo sát điều kiện sinh tổng hợp chitinase
    từ nấm L. lecanii .

    49
    3.1.1. Sàng lọc chủng nấm L. lecanii sinh tổng hợp chitinase cao . 49
    3.1.2. Kiểm tra chủng nấm L. lecanii 43H dựa vào đoạn gen 28S rRNA . 49
    3.1.3. Khảo sát điều kiện sinh tổng hợp chitinase 52
    3.2. Tinh sạch và đánh giá tính chất lý hóa của chitinase từ chủng
    nấm L. Lecanii 43H .

    57
    3.2.1. Tinh sạch chitinase . 57
    3.2.2. Đánh giá tính chất lý hóa của chitinase từ chủng nấm L. lecanii
    43H .

    59
    3.3. Nhân dòng gen mã hóa chitinase từ chủng nấm L. lecanii 43H 66
    3.4. Biểu hiện, tinh sạch và đánh giá tính chất lý hóa của rChit trong
    nấm men P. pastoris X33

    70
    3.4.1. Thiết kế plasmid pPChit biểu hiện gen Chit trong nấm men . 70
    3.4.2. Biểu hiện chitinase tái tổ hợp trong nấm men P. pastoris . 71
    3.4.3. Tinh sạch rChit . 76
    3.4.4. Đánh giá tính chất lý hóa của rChit từ nấm men P. pastoris X33 78
    3.5. Thử nghiệm khả năng ức chế rệp và nấm bệnh của chitinase và
    bào tử từ nấm L. lecanii .

    84
    3.5.1. Ảnh hưởng của chitinase tới sự phát triển của nấm bệnh hại cây
    trồng .

    84
    3.5.2. Ảnh hưởng của rChit tới khả năng phát triển của rệp 86 vi
    3.5.3. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến khả năng phát triển của sợi nấm . 87
    3.5.4. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến khả năng nẩy mầm của bào tử nấm 88
    3.5.5. Khả năng diệt rệp của chủng nấm L. lecanii 43H 89
    KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ . 92
    1. KẾT LUẬN 92
    2. KIẾN NGHỊ . 92
    CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN . 93
    TÀI LIỆU THAM KHẢO . 94
    DANH MỤC PHỤ LỤC . 113

    vii
    DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT
    Tiếng Anh Tiếng Việt
    BLAST Basic local alignment search tool Phần mềm so sánh trình tự
    bp Base pair Cặp bazơ
    cDNA Complement DNA DNA tạo ra từ mRNA
    Chit Gene encoding chitinase Gen mã hóa chitinase
    CMC Cacboxyl methyl cellulose Cacboxyl methyl cellulose
    DEPC Diethylpyrocarbonate Diethylpyrocarbonate
    DNA Deoxyribonucleic acid Axit deoxyribonucleic
    DNase Deoxyribonuclease Enzyme thủy phân DNA
    dNTPs 2-Deoxynucleoside 5-
    triphosphate
    Các nucleotide
    ĐC Control Đối chứng
    IPTG Isopropyl-beta-D-
    thiogalactopyranoside
    Isopropyl-beta-D-
    thiogalactopyranoside
    EDTA Ethylenediamine tetraacetic acid Axit ethylenediamine tetraacetic
    EtBr Ethidium bromide Ethidium bromide
    kb Kilo base Kilo base
    kDa Kilo Dalton Kilo Dalton
    M Marker Thang chuẩn
    OD Optical density Mật độ quang
    PCR Polymerase chain reaction Phản ứng khuếch đại gen
    RNA Ribonucleic acid Axit ribonucleic viii
    RNase Ribonuclease Enzyme thủy phân RNA
    RT-PCR Reverse transcription polymerase
    chain reaction
    Phản ứng khuếch đại gen
    rChit Recombinante chitinase Chitinase tái tổ hợp
    SDS-
    PAGE
    Sodium dodecyl sulfate
    Polyacrylamide gel
    electrophoresis
    Điện di protein
    Taq Thermus aquaticus Thermus aquaticus
    TBE Tris boric acid EDTA Tris boric acid EDTA
    TE Tris EDTA Tris EDTA
    TEMED N,N,N,N-
    Tetramethylethylenediamine
    N,N,N,N-
    Tetramethylethylenediamine
    v/v Volume/volume Thể tích/thể tích
    w/v Weight/volume Khối lượng/thể tích
    ix
    DANH MỤC HÌNH
    Trang
    Hình 1.1. Cấu trúc bậc 2 của chitinase từ nấm C. immitis . 10
    Hình 1.2. Cấu trúc của chitinase từ vi khuẩn Ralstonia sp. A-471 . 11
    Hình 1.3. Cơ chế xúc tác của chitinase B từ vi khuẩn S. mecescens . 12
    Hình 1.4. Cơ chế thủy phân β-chitin bởi chitinase A từ vi khuẩn
    B. circulans .

    13
    Hình 2.1. Đường chuẩn nồng độ N-acetyl glucosamine theo phương pháp
    Miller

    36
    Hình 2.2. Các bước tinh sạch chitinase 38
    Hình 2.3. Đường chuẩn hàm lượng albumin huyết thanh bò theo
    Bradford

    39
    Hình 2.4. Đồ thị Lineawever-Burk 40
    Hình 2.5. Sơ đồ mô tả vị trí gắn của gen Chit vào genome của nấm men
    P. pastoris X33 .

    46
    Hình 3.1. Hoạt tính chitinase của 8 chủng nấm L. lecanii . 49
    Hình 3.2. Hình ảnh điện di sản phẩm PCR từ khuôn DNA của chủng nấm
    L. lecanii 43H; Sản phẩm Plasmid và Sản phẩm cắt vector tái tổ hợp bằng
    XhoI và XbaI


    50
    Hình 3.3. Trình tự đoạn gen 28S rRNA từ chủng nấm L. lecanii 43H;
    Cây phân loại trình tự gen 28S rRNA từ chủng nấm L. lecanii 43H với
    các loài khác .


    51
    Hình 3.4. Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy và nhiệt độ nuôi cấy đến khả
    năng sinh tổng hợp chitinase .

    52
    Hình 3.5. Ảnh hưởng của nồng độ chitin huyền phù và nguồn nitơ đến x
    khả năng sinh tổng hợp chitinase 54
    Hình 3.6. Ảnh hưởng của nguồn cacbon và pH nuôi cấy lên khả năng
    sinh tổng hợp chitinase

    55
    Hình 3.7. Hình ảnh điện di SDS-PAGE của chitinase tinh sạch từ chủng
    nấm L. lecanii 43H và hoạt tính chitinase của các phân đoạn qua cột
    DEAE-Sephadex A-50 trên đĩa thạch có bổ sung cơ chất chitin huyền phù
    0,5%



    58
    Hình 3.8. Nhiệt độ và pH thích hợp của chitinase 60
    Hình 3.9. Độ bền nhiệt và độ bền pH của chitinase 61
    Hình 3.10. Ảnh hưởng của dung môi hữu cơ và chất tẩy rửa lên hoạt tính
    chitinase .

    64
    Hình 3.11. Phân tích TLC các sản phẩm thủy phân chitin bởi chitinase . 66
    Hình 3.12. Kết quả nhân dòng gen Chit từ DNA hệ gen . 66
    Hình 3.13. Trình tự gen Chit và amino acid suy diễn từ L. lecanii 43H . 67
    Hình 3.14. Cây phân loại dựa vào so sánh trình tự gen Chit của chủng
    L. Lecanii 43H và các chủng khác trong GenBank

    68
    Hình 3.15. Kết quả nhân dòng gen Chit từ mRNA 69
    Hình 3.16. Cây phân loại dựa vào so sánh trình tự amino acid của rChit
    từ L. Lecanii 43H và các chủng khác trong GenBank

    70
    Hình 3.17. Kết quả thiết kế cấu trúc vector biểu hiện pPChit . 70
    Hình 3.18. Điện di sản phẩm kiểm tra hệ biểu hiện rChit trong P. pastoris
    X33 .

    71
    Hình 3.19. Khả năng sinh tổng hợp rChit của chủng tái tổ hợp khi được
    cảm ứng ở các nồng độ methanol khác nhau

    73
    Hình 3.20. Khả năng sinh tổng hợp rChit ở các khoảng thời gian khác
    nhau

    74 xi
    Hình 3.21. Điện di SDS-PAGE của rChit tinh sạch từ P. pastoris X33 77
    Hình 3.22. Nhiệt độ và pH thích hợp của rChit . 79
    Hình 3.23. Độ bền nhiệt và độ bền pH của rChit . 80
    Hình 3.24. Ảnh hưởng của dung môi hữu cơ và chất tẩy rửa lên hoạt tính
    rChit .

    83
    Hình 3.25. Ức chế sự phát triển của nấm bệnh F. oxysporum và R. solani
    bởi chitinase .

    86
    Hình 3.26. Sợi nấm của R. solani và F. oxysporum được xử lý với nước
    và với chitinase từ chủng nấm L. lecanii 43H

    86
    Hình 3.27. Hỗn hợp chitin của rệp được xử lý với nước và rChit từ nấm
    men P. pastoris X33 .

    87
    Hình 3.28. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến tỉ lệ nẩy mầm của
    bào tử nấm L. lecanii 43H .

    89
    Hình 3.29. Mô hình lá cải có rệp sau khi được phun dịch bào tử nấm và
    biểu đồ thể hiện khả năng diệt rệp bằng bào tử của chủng nấm L. lecanii
    43H


    91

    Xem Thêm: Nghiên cứu đặc tính của chitinase tự nhiên và biểu hiện chitinase tái tổ hợp từ chủng nấm Lecanicillium lecanii
    Nội dung trên chỉ thể hiện một phần hoặc nhiều phần trích dẫn. Để có thể xem đầy đủ, chi tiết và đúng định dạng tài liệu, bạn vui lòng tải tài liệu. Hy vọng tài liệu Nghiên cứu đặc tính của chitinase tự nhiên và biểu hiện chitinase tái tổ hợp từ chủng nấm Lecanicillium lecanii sẽ giúp ích cho bạn.
    #1
  7. Đang tải dữ liệu...

    Chia sẻ link hay nhận ngay tiền thưởng
    Vui lòng Tải xuống để xem tài liệu đầy đủ.

    Gửi bình luận

    ♥ Tải tài liệu

social Thư Viện Tài Liệu

Từ khóa được tìm kiếm

Nobody landed on this page from a search engine, yet!

Quyền viết bài

  • Bạn Không thể gửi Chủ đề mới
  • Bạn Không thể Gửi trả lời
  • Bạn Không thể Gửi file đính kèm
  • Bạn Không thể Sửa bài viết của mình
  •  
DMCA.com Protection Status